雞肝細(xì)胞無血清培養(yǎng)基CM01產(chǎn)品使用說明書

外觀：米白色粉末              使用規(guī)格：20.32g/L

儲(chǔ)存：2℃- 8℃密封保存        保質(zhì)期：24個(gè)月

一.產(chǎn)品說明

雞肝細(xì)胞無血清培養(yǎng)基CM01為成分明確培養(yǎng)基，不含任何動(dòng)物來源組分，適用于雞肝懸浮細(xì)胞和禽腺病毒（FAdV）的培養(yǎng)。使用CM01培養(yǎng)基培養(yǎng)雞肝懸浮細(xì)胞，以1.0×10⁶cells/mL密度接種，培養(yǎng)72小時(shí)，收獲細(xì)胞密度≥ 6×10⁶cells/mL，細(xì)胞活率 ≥ 95%。健康雞肝懸浮細(xì)胞培養(yǎng)72小時(shí)后，使用CM01培養(yǎng)基將細(xì)胞懸液稀釋至2.5×10⁶cells/mL后接種病毒，維持72h-96h可獲得較高的病毒滴度。相較于傳統(tǒng)貼壁培養(yǎng)，本產(chǎn)品可提高抗原生產(chǎn)效率，降低抗原制造成本。

二.配制方法

1．取適量細(xì)胞培養(yǎng)用水于配制容器中，預(yù)熱至37℃。

2．將培養(yǎng)基粉末加入上述容器中，攪拌至粉末完全溶解，繼續(xù)攪拌1小時(shí)。

3．將 NaHCO₃ 以2.85g/L的量加入培養(yǎng)液中，攪拌至完全溶解，定容，繼續(xù)攪拌5分鐘。

4．使用 0.22 μm 微孔濾膜或?yàn)V芯正壓過濾，2℃ - 8℃ 避光、密封保存。

雞肝懸浮細(xì)胞的復(fù)蘇、傳代和凍存

一．細(xì)胞復(fù)蘇

1．37℃ 水浴預(yù)熱CM01培養(yǎng)基，取20-30mL溫?zé)岬腃M01培養(yǎng)基至125mL搖瓶中備用。

2．從液氮罐中取出凍存細(xì)胞，迅速轉(zhuǎn)移至37℃水浴，輕柔搖晃至剛好融化，然后立即將細(xì)胞懸液加入125mL搖瓶中，活細(xì)胞密度應(yīng)控制在0.8-1.2×10⁶cells/mL。

3．將125mL 搖瓶置于37℃ ，5% CO₂轉(zhuǎn)速140rpm的細(xì)胞培養(yǎng)搖床中培養(yǎng)。

二．細(xì)胞傳代

1．搖瓶培養(yǎng)（125mL搖瓶為例）

起始密度：1.0×10⁶cells/mL

培養(yǎng)體積：30mL

其他參數(shù)：37℃、5% CO?、140rpm

培養(yǎng)72小時(shí)后，收獲細(xì)胞密度≥ 6×10⁶ cells/mL，活率≥95%。

2．反應(yīng)器培養(yǎng)（3L反應(yīng)器為例）

起始密度：1.0×10⁶cells/mL

培養(yǎng)體積：1700mL

其他參數(shù)：37℃、220 rpm、pH7.35、溶氧40%

培養(yǎng)72小時(shí)后，收獲細(xì)胞密度≥ 6×10⁶cells/mL，活率≥95%。

三．細(xì)胞凍存

1．凍存盒準(zhǔn)備：向程序降溫盒加入適量異丙醇，4℃預(yù)冷。

2．凍存液配制：30%CM01，30%條件培養(yǎng)基（離心后的培養(yǎng)上清液），30%雞血清（或胎牛血清），10%DMSO。DMSO需緩慢加入。

3．細(xì)胞的處理：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞（活率>95%），1000rpm離心5分鐘，取出部分上清液用于凍存液配制，棄剩余上清，用凍存液輕柔重懸細(xì)胞，快速分裝至凍存管，凍存的細(xì)胞密度應(yīng)為 3.0×10⁷cells/mL。 

4．凍存程序：將凍存管置于程序降溫盒，- 80℃保存24小時(shí)后，轉(zhuǎn)移至液氮長(zhǎng)期儲(chǔ)存。